JavaScript hiện không khả dụng trên trình duyệt của bạn.Khi javascript bị vô hiệu hóa, một số chức năng của trang web này sẽ không hoạt động.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Tây Ban Nha * Các tác giả này có một số hiểu biết sâu sắc về công trình này. Nền tảng đóng góp: Axit hyaluronic (HA) là một polysaccharide tự nhiên được sử dụng trong sản xuất chất độn da cho mục đích thẩm mỹ.Vì nó có thời gian bán hủy kéo dài vài ngày trong các mô của con người, chất độn da dựa trên HA được biến đổi về mặt hóa học để kéo dài tuổi thọ của chúng trong cơ thể.Sự thay đổi phổ biến nhất trong chất độn dựa trên HA thương mại là sử dụng 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) như một chất liên kết chéo để liên kết chéo các chuỗi HA.BDDE dư hoặc chưa phản ứng được coi là không độc hại ở mức <2 phần triệu (ppm);do đó, lượng BDDE còn lại trong chất làm đầy da cuối cùng phải được định lượng để đảm bảo an toàn cho bệnh nhân.Vật liệu và phương pháp: Nghiên cứu này mô tả việc phát hiện và xác định đặc điểm của sản phẩm phụ của phản ứng liên kết ngang giữa BDDE và HA trong điều kiện kiềm bằng cách kết hợp sắc ký lỏng và khối phổ (LC-MS).Kết quả: Sau các phân tích khác nhau, người ta nhận thấy rằng các điều kiện kiềm và nhiệt độ cao được sử dụng để khử trùng hydrogel HA-BDDE đã thúc đẩy sự hình thành của sản phẩm phụ mới này, hợp chất “giống như propylene glycol”.Phân tích LC-MS xác nhận rằng sản phẩm phụ có cùng khối lượng đơn vị đồng vị với BDDE, thời gian lưu (tR) khác và chế độ hấp thụ UV (λ = 200 nm) khác.Không giống như BDDE, quan sát thấy trong phân tích LC-MS rằng trong cùng điều kiện đo, sản phẩm phụ này có tốc độ phát hiện cao hơn ở bước sóng 200 nm.Kết luận: Những kết quả này chỉ ra rằng không có epoxit trong cấu trúc của hợp chất mới này.Cuộc thảo luận được mở ra để đánh giá rủi ro của sản phẩm phụ mới này được tìm thấy trong quá trình sản xuất HA-BDDE hydrogel (chất làm đầy da HA) cho mục đích thương mại.Từ khóa: axit hyaluronic, chất làm đầy da HA, axit hyaluronic liên kết ngang, phân tích BDDE, LC-MS, sản phẩm phụ BDDE.
Chất làm đầy dựa trên axit hyaluronic (HA) là chất làm đầy da phổ biến và phổ biến nhất được sử dụng cho mục đích thẩm mỹ.1 Chất làm đầy da này là một hydrogel, thường bao gồm> 95% nước và 0,5-3% HA, tạo cho chúng một cấu trúc giống như gel.2 HA là một polysaccharide và là thành phần chính của chất nền ngoại bào của động vật có xương sống.Một trong những thành phần.Nó bao gồm (1,4) -glucuronic acid-β (1,3) -N-acetylglucosamine (GlcNAc) các đơn vị disaccharide lặp lại được nối với nhau bằng các liên kết glycosidic.Mô hình disaccharide này giống nhau ở tất cả các sinh vật.So với một số chất làm đầy dựa trên protein (chẳng hạn như collagen), đặc tính này làm cho HA trở thành một phân tử tương thích sinh học cao.Những chất làm đầy này có thể thể hiện tính đặc hiệu của chuỗi axit amin mà hệ thống miễn dịch của bệnh nhân có thể nhận ra.
Khi được sử dụng như một chất làm đầy da, hạn chế chính của HA là sự luân chuyển nhanh chóng trong các mô do sự hiện diện của một họ enzym cụ thể gọi là hyaluronidase.Cho đến nay, một số thay đổi hóa học trong cấu trúc HA đã được mô tả để tăng thời gian bán hủy của HA trong mô.3 Hầu hết các sửa đổi này đều cố gắng làm giảm sự tiếp cận của hyaluronidase với các polyme polysaccharide bằng cách liên kết chéo các chuỗi HA.Do đó, do sự hình thành các cầu nối và liên kết cộng hóa trị liên phân tử giữa cấu trúc HA và tác nhân liên kết ngang, hydrogel HA liên kết ngang tạo ra nhiều sản phẩm chống phân hủy enzym hơn HA tự nhiên.4-6
Cho đến nay, các chất liên kết chéo hóa học được sử dụng để sản xuất HA liên kết chéo bao gồm methacrylamide, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) Và poly (ethylene glycol) diglycidyl ether.10, 11 BDDE hiện là tác nhân liên kết chéo được sử dụng phổ biến nhất.Mặc dù những loại hydrogel này đã được chứng minh là an toàn trong nhiều thập kỷ, nhưng các tác nhân liên kết chéo được sử dụng là thuốc thử phản ứng có thể gây độc tế bào và trong một số trường hợp, có thể gây đột biến.12 Do đó, hàm lượng dư của chúng trong hydrogel cuối cùng phải cao.BDDE được coi là an toàn khi nồng độ còn lại nhỏ hơn 2 phần triệu (ppm).4
Có một số phương pháp để phát hiện nồng độ BDDE dư lượng thấp, mức độ liên kết ngang và vị trí thay thế trong hydrogel HA, chẳng hạn như sắc ký khí, sắc ký loại trừ kích thước kết hợp với khối phổ (MS), phương pháp đo huỳnh quang cộng hưởng từ hạt nhân (NMR), và Dãy diode kết hợp với sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).13-17 Nghiên cứu này mô tả việc phát hiện và xác định đặc điểm của một sản phẩm phụ trong hydrogel HA liên kết chéo cuối cùng được tạo ra bởi phản ứng của BDDE và HA trong điều kiện kiềm.HPLC và sắc ký lỏng-khối phổ (phân tích LC-MS).Vì độc tính của sản phẩm phụ này của BDDE chưa được biết rõ, chúng tôi khuyến nghị rằng việc định lượng dư lượng của nó nên được xác định theo cách tương tự như phương pháp thường được thực hiện trên BDDE trong sản phẩm cuối cùng.
Muối natri thu được của HA (Công ty TNHH Shiseido, Tokyo, Nhật Bản) có trọng lượng phân tử ~ 1.368.000 Da (phương pháp Laurent) 18 và độ nhớt nội tại là 2,20 m3 / kg.Đối với phản ứng liên kết chéo, BDDE (≥95%) được mua từ Công ty Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Hoa Kỳ).Nước muối đệm photphat có pH 7,4 được mua từ Công ty Sigma-Aldrich.Tất cả các dung môi, axetonitril và nước được sử dụng trong phân tích LC-MS đều được mua từ chất lượng cấp HPLC.Axit fomic (98%) được mua ở dạng cấp thuốc thử.
Tất cả các thí nghiệm được thực hiện trên hệ thống UPLC Acquity (Waters, Milford, MA, USA) và được kết nối với một máy quang phổ khối bốn cực ba cực API 3000 được trang bị nguồn ion hóa tia điện (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Quá trình tổng hợp các hydrogel HA liên kết ngang được bắt đầu bằng cách thêm 198 mg BDDE vào dung dịch natri hyaluronat (NaHA) 10% (w / w) với sự có mặt của 1% kiềm (natri hydroxit, NaOH).Nồng độ BDDE cuối cùng trong hỗn hợp phản ứng là 9,9 mg / mL (0,049 mM).Sau đó, hỗn hợp phản ứng được trộn kỹ và đồng nhất và được để tiến hành ở 45 ° C trong 4 giờ.19 Độ pH của phản ứng được duy trì ở ~ 12.
Sau đó, hỗn hợp phản ứng được rửa bằng nước, và hydrogel HA-BDDE cuối cùng được lọc và pha loãng với đệm PBS để đạt được nồng độ HA từ 10 đến 25 mg / mL và pH cuối cùng là 7,4.Để khử trùng các hydrogel HA liên kết chéo được sản xuất, tất cả các hydrogel này đều được hấp tiệt trùng (120 ° C trong 20 phút).BDDE-HA hydrogel tinh khiết được bảo quản ở 4 ° C cho đến khi phân tích.
Để phân tích BDDE có trong sản phẩm HA liên kết ngang, một mẫu 240 mg được cân và đưa vào lỗ trung tâm (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; thể tích 0,5 mL) và ly tâm ở tốc độ 10.000 vòng / phút ở nhiệt độ phòng 10 phút.Tổng cộng 20 µL chất lỏng kéo xuống được thu thập và phân tích.
Để phân tích chất chuẩn BDDE (Sigma-Aldrich Co) trong điều kiện kiềm (1%, 0,1% và 0,01% NaOH), nếu các điều kiện sau được đáp ứng, mẫu lỏng là 1:10, 1: 100, hoặc lên đến 1: 1.000.000 Nếu cần, sử dụng nước khử ion MilliQ để phân tích.
Đối với các nguyên liệu ban đầu được sử dụng trong phản ứng liên kết ngang (HA 2%, H2O, 1% NaOH, và 0,049 mM BDDE), 1 mL mỗi mẫu chuẩn bị từ các nguyên liệu này được phân tích bằng cách sử dụng các điều kiện phân tích giống nhau.
Để xác định tính đặc trưng của các pic xuất hiện trong bản đồ ion, 10 µL dung dịch chuẩn BDDE 100 ppb (Sigma-Aldrich Co) đã được thêm vào mẫu 20 µL.Trong trường hợp này, nồng độ cuối cùng của chất chuẩn trong mỗi mẫu là 37 ppb.
Đầu tiên, chuẩn bị dung dịch gốc BDDE với nồng độ 11.000 mg / L (11.000 ppm) bằng cách pha loãng 10 μL BDDE chuẩn (Sigma-Aldrich Co) với 990 μL nước MilliQ (tỷ trọng 1,1 g / mL).Sử dụng dung dịch này để chuẩn bị dung dịch BDDE 110 µg / L (110 ppb) làm dung dịch pha loãng chuẩn trung gian.Sau đó, sử dụng chất pha loãng chuẩn BDDE trung gian (110 ppb) để chuẩn bị đường chuẩn bằng cách pha loãng chất pha loãng trung gian nhiều lần để đạt được nồng độ mong muốn là 75, 50, 25, 10 và 1 ppb.Như trong Hình 1, ta thấy rằng đường chuẩn BDDE từ 1,1 đến 110 ppb có độ tuyến tính tốt (R2> 0,99).Đường chuẩn được lặp lại trong bốn thí nghiệm độc lập.
Hình 1 Đường chuẩn BDDE thu được bằng phân tích LC-MS, trong đó mối tương quan tốt được quan sát thấy (R2> 0,99).
Viết tắt: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, sắc ký lỏng và khối phổ.
Để xác định và định lượng các tiêu chuẩn BDDE có trong HA liên kết chéo và các tiêu chuẩn BDDE trong dung dịch gốc, phân tích LC-MS đã được sử dụng.
Sự phân tách sắc ký đạt được trên cột LUNA 2,5 µm C18 (2) -HST (50 × 2,0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) và được giữ ở nhiệt độ phòng (25 ° C) trong quá trình phân tích.Pha động bao gồm axetonitril (dung môi A) và nước (dung môi B) chứa 0,1% axit fomic.Pha động được rửa giải bằng rửa giải gradient.Gradient như sau: 0 phút, 2% A;1 phút, 2% A;6 phút, 98% A;7 phút, 98% A;7,1 phút, 2% A;10 phút, 2% A. Thời gian chạy là 10 phút và thể tích tiêm là 20 µL.Thời gian lưu của BDDE là khoảng 3,48 phút (dao động từ 3,43 đến 4,14 phút dựa trên các thí nghiệm).Pha động được bơm với tốc độ dòng chảy 0,25 mL / phút để phân tích LC-MS.
Để phân tích và định lượng BDDE bằng MS, hệ thống UPLC (Waters) được kết hợp với máy quang phổ khối bốn cực ba cực API 3000 (AB SCIEX) được trang bị nguồn ion hóa tia điện và phân tích được thực hiện ở chế độ ion dương (ESI +).
Theo phân tích mảnh ion được thực hiện trên BDDE, mảnh có cường độ cao nhất được xác định là mảnh tương ứng với 129,1 Da (Hình 6).Do đó, trong chế độ giám sát đa ion (MIM) để định lượng, chuyển đổi khối lượng (tỷ lệ khối lượng trên điện tích [m / z]) của BDDE là 203,3 / 129,1 Da.Nó cũng sử dụng chế độ quét toàn bộ (FS) và chế độ quét ion sản phẩm (PIS) để phân tích LC-MS.
Để xác minh tính đặc hiệu của phương pháp, một mẫu trắng (pha động ban đầu) được phân tích.Không có tín hiệu nào được phát hiện trong mẫu trắng với độ chuyển đổi khối lượng là 203,3 / 129,1 Da.Về độ lặp lại của thí nghiệm, 10 lần tiêm chuẩn 55 ppb (ở giữa đường chuẩn) đã được phân tích, dẫn đến độ lệch chuẩn còn lại (RSD) <5% (dữ liệu không được hiển thị).
Hàm lượng BDDE còn lại được định lượng trong tám hydrogel HA liên kết chéo BDDE hấp tiệt trùng khác nhau, tương ứng với bốn thí nghiệm độc lập.Như được mô tả trong phần “Vật liệu và phương pháp”, việc định lượng được đánh giá bằng giá trị trung bình của đường cong hồi quy của độ pha loãng chuẩn BDDE, tương ứng với đỉnh duy nhất được phát hiện ở quá trình chuyển đổi khối lượng BDDE là 203,3 / 129,1 Da, với độ lưu thời gian 3,43 đến 4,14 phút Không phải chờ đợi.Hình 2 cho thấy một sắc ký đồ mẫu của chất chuẩn tham chiếu BDDE 10 ppb.Bảng 1 tóm tắt hàm lượng BDDE còn lại của tám hydrogel khác nhau.Phạm vi giá trị là 1 đến 2,46 ppb.Do đó, nồng độ BDDE còn lại trong mẫu có thể chấp nhận được cho con người (<2 ppm).
Hình 2 Sắc ký đồ ion của chất chuẩn tham chiếu BDDE 10 ppb (Sigma-Aldrich Co), chuyển tiếp MS (m / z) thu được bằng phân tích LC-MS là 203,30 / 129,10 Da (ở chế độ MRM dương).
Viết tắt: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, sắc ký lỏng và khối phổ;MRM, giám sát nhiều phản ứng;MS, khối lượng;m / z, tỷ số khối lượng trên điện tích.
Lưu ý: Các mẫu 1-8 là hydrogel HA liên kết chéo BDDE được hấp tiệt trùng.Lượng BDDE còn lại trong hydrogel và đỉnh của thời gian lưu BDDE cũng được báo cáo.Cuối cùng, sự tồn tại của các đỉnh mới với thời gian lưu khác nhau cũng được báo cáo.
Viết tắt: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, axit hyaluronic;MRM, giám sát nhiều phản ứng;tR, thời gian lưu;LC-MS, sắc ký lỏng và khối phổ;RRT, thời gian lưu tương đối.
Đáng ngạc nhiên, phân tích sắc ký đồ ion LC-MS cho thấy rằng dựa trên tất cả các mẫu hydrogel HA liên kết ngang được hấp tiệt trùng được phân tích, có thêm một đỉnh ở thời gian lưu ngắn hơn từ 2,73 đến 3,29 phút.Ví dụ, Hình 3 cho thấy sắc ký đồ ion của một mẫu HA liên kết chéo, trong đó một pic bổ sung xuất hiện ở một thời gian lưu khác khoảng 2,71 phút.Thời gian lưu tương đối quan sát được (RRT) giữa đỉnh mới quan sát được và đỉnh từ BDDE được tìm thấy là 0,79 (Bảng 1).Vì chúng ta biết rằng pic mới quan sát được ít được giữ lại trong cột C18 được sử dụng trong phân tích LC-MS, nên pic mới có thể tương ứng với một hợp chất phân cực hơn BDDE.
Hình 3 Sắc ký đồ ion của mẫu hydrogel HA liên kết chéo thu được bằng LC-MS (chuyển đổi khối lượng MRM 203,3 / 129,0 Da).
Viết tắt: HA, axit hyaluronic;LC-MS, sắc ký lỏng và khối phổ;MRM, giám sát nhiều phản ứng;RRT, thời gian lưu tương đối;tR, thời gian lưu.
Để loại trừ khả năng các pic mới quan sát được có thể là chất gây ô nhiễm ban đầu có trong nguyên liệu thô được sử dụng, những nguyên liệu thô này cũng được phân tích bằng cùng một phương pháp phân tích LC-MS.Các nguyên liệu ban đầu được phân tích bao gồm nước, 2% NaHA trong nước, 1% NaOH trong nước, và BDDE ở cùng nồng độ được sử dụng trong phản ứng liên kết ngang.Sắc ký đồ ion của nguyên liệu ban đầu được sử dụng không cho thấy bất kỳ hợp chất hoặc pic nào, và thời gian lưu của nó tương ứng với pic mới quan sát được.Thực tế này loại bỏ ý tưởng rằng không chỉ nguyên liệu ban đầu có thể chứa bất kỳ hợp chất hoặc chất nào có thể gây trở ngại cho quy trình phân tích, mà không có dấu hiệu nào về khả năng nhiễm chéo với các sản phẩm phòng thí nghiệm khác.Các giá trị nồng độ thu được sau khi phân tích LC-MS của BDDE và các pic mới được thể hiện trong Bảng 2 (mẫu 1-4) và sắc ký đồ ion trong Hình 4.
Lưu ý: Các mẫu 1-4 tương ứng với nguyên liệu thô được sử dụng để sản xuất hydrogel HA liên kết chéo BDDE được hấp tiệt trùng.Các mẫu này không được hấp tiệt trùng.
Viết tắt: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, axit hyaluronic;LC-MS, sắc ký lỏng và khối phổ;MRM, giám sát nhiều phản ứng.
Hình 4 tương ứng với sắc ký đồ LC-MS của một mẫu nguyên liệu thô được sử dụng trong phản ứng liên kết ngang của HA và BDDE.
Lưu ý: Tất cả những chất này đều được đo ở cùng nồng độ và tỷ lệ được sử dụng để thực hiện phản ứng liên kết ngang.Các con số của nguyên liệu thô được phân tích bằng sắc ký đồ tương ứng với: (1) nước, (2) dung dịch nước HA 2%, (3) dung dịch nước NaOH 1%.Phân tích LC-MS được thực hiện để chuyển đổi khối lượng 203,30 / 129,10 Da (ở chế độ MRM tích cực).
Viết tắt: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, axit hyaluronic;LC-MS, sắc ký lỏng và khối phổ;MRM, giám sát nhiều phản ứng.
Các điều kiện dẫn đến sự hình thành các đỉnh mới đã được nghiên cứu.Để nghiên cứu các điều kiện phản ứng được sử dụng để tạo ra hydrogel HA liên kết ngang ảnh hưởng như thế nào đến khả năng phản ứng của chất liên kết ngang BDDE, dẫn đến sự hình thành các đỉnh mới (có thể có sản phẩm phụ), các phép đo khác nhau đã được thực hiện.Trong các phép xác định này, chúng tôi đã nghiên cứu và phân tích chất liên kết chéo BDDE cuối cùng, được xử lý với các nồng độ khác nhau của NaOH (0%, 1%, 0,1% và 0,01%) trong môi trường nước, sau đó có hoặc không hấp tiệt trùng.Quy trình vi khuẩn để mô phỏng các điều kiện tương tự giống như phương pháp được sử dụng để sản xuất hydrogel HA liên kết chéo.Như được mô tả trong phần “Vật liệu và phương pháp”, sự chuyển đổi khối lượng của mẫu được phân tích bằng LC-MS thành 203,30 / 129,10 Da.BDDE và nồng độ của pic mới được tính toán, và kết quả được thể hiện trong Bảng 3. Không phát hiện thấy pic mới nào trong các mẫu không được hấp tiệt trùng, bất kể sự có mặt của NaOH trong dung dịch (mẫu 1-4, Bảng 3).Đối với các mẫu hấp tiệt trùng, các pic mới chỉ được phát hiện khi có mặt NaOH trong dung dịch, và sự hình thành pic dường như phụ thuộc vào nồng độ NaOH trong dung dịch (mẫu 5-8, Bảng 3) (RRT = 0,79).Hình 5 cho thấy một ví dụ về sắc ký đồ ion, cho thấy hai mẫu hấp tiệt trùng có hoặc không có NAOH.
Viết tắt: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, sắc ký lỏng và khối phổ;MRM, giám sát nhiều phản ứng.
Lưu ý: Sắc ký đồ trên: Mẫu được xử lý bằng dung dịch nước NaOH 0,1% và được hấp tiệt trùng (120 ° C trong 20 phút).Sắc ký đồ dưới cùng: Mẫu không được xử lý bằng NaOH mà được hấp tiệt trùng trong cùng điều kiện.Sự chuyển đổi khối lượng 203,30 / 129,10 Da (ở chế độ MRM tích cực) được phân tích bởi LC-MS.
Viết tắt: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, sắc ký lỏng và khối phổ;MRM, giám sát nhiều phản ứng.
Trong tất cả các mẫu hấp tiệt trùng, có hoặc không có NaOH, nồng độ BDDE đã giảm đáng kể (lên đến 16,6 lần) (mẫu 5-8, Bảng 2).Sự giảm nồng độ BDDE có thể là do ở nhiệt độ cao, nước có thể hoạt động như một bazơ (nucleophile) để mở vòng epoxit của BDDE để tạo thành hợp chất 1,2-diol.Chất lượng đơn đồng vị của hợp chất này khác với chất lượng của BDDE và do đó sẽ không bị ảnh hưởng.LC-MS phát hiện một sự dịch chuyển khối lượng là 203,30 / 129,10 Da.
Cuối cùng, những thí nghiệm này cho thấy rằng việc tạo ra các pic mới phụ thuộc vào sự hiện diện của BDDE, NAOH và quá trình hấp tiệt trùng, nhưng không liên quan gì đến HA.
Đỉnh mới được tìm thấy ở thời gian lưu khoảng 2,71 phút sau đó được đặc trưng bởi LC-MS.Với mục đích này, BDDE (9,9 mg / mL) được ủ trong dung dịch nước NaOH 1% và được hấp tiệt trùng.Trong Bảng 4, các đặc điểm của pic mới được so sánh với pic chuẩn BDDE đã biết (thời gian lưu khoảng 3,47 phút).Dựa trên phân tích sự phân mảnh ion của hai pic, có thể kết luận rằng pic có thời gian lưu là 2,72 phút cho thấy các đoạn giống như pic BDDE, nhưng với cường độ khác nhau (Hình 6).Đối với pic tương ứng với thời gian lưu (PIS) là 2,72 phút, pic mạnh hơn được quan sát thấy sau khi phân mảnh ở khối lượng 147 Da.Ở nồng độ BDDE (9,9 mg / mL) được sử dụng trong phép xác định này, các chế độ hấp thụ khác nhau (UV, λ = 200 nm) trong phổ tử ngoại cũng được quan sát sau khi tách sắc ký (Hình 7).Đỉnh có thời gian lưu 2,71 phút vẫn nhìn thấy được ở 200 nm, trong khi pic BDDE không thể quan sát được trên sắc ký đồ ở cùng điều kiện.
Bảng 4 Các kết quả đặc trưng của pic mới với thời gian lưu khoảng 2,71 phút và pic BDDE với thời gian lưu là 3,47 phút
Lưu ý: Để có được những kết quả này, các phép phân tích LC-MS và HPLC (MRM và PIS) được thực hiện trên hai pic.Đối với phân tích HPLC, phát hiện tia cực tím với bước sóng 200 nm được sử dụng.
Viết tắt: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HPLC, sắc ký lỏng hiệu năng cao;LC-MS, sắc ký lỏng và khối phổ;MRM, giám sát nhiều phản ứng;m / z, tỷ lệ khối lượng trên điện tích;PIS, quét Ion sản phẩm;đèn tia cực tím, tia cực tím.
Lưu ý: Các mảnh khối lượng thu được bằng phân tích LC-MS (PIS).Sắc ký đồ trên: phổ khối lượng của các mảnh mẫu chuẩn BDDE.Sắc ký đồ đáy: Phổ khối lượng của pic mới được phát hiện (RRT kết hợp với pic BDDE là 0,79).BDDE được xử lý trong dung dịch NaOH 1% và được hấp tiệt trùng.
Viết tắt: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, sắc ký lỏng và khối phổ;MRM, giám sát nhiều phản ứng;PIS, quét ion sản phẩm;RRT, thời gian lưu tương đối.
Hình 7 Sắc ký đồ của ion tiền thân 203,30 Da, và (A) pic mới với thời gian lưu là 2,71 phút và (B) phát hiện tia cực tím của pic chuẩn so sánh BDDE ở 3,46 phút ở 200 nm.
Trong tất cả các hydrogel HA liên kết ngang được tạo ra, người ta quan sát thấy nồng độ BDDE còn lại sau khi định lượng LC-MS là <2 ppm, nhưng một đỉnh mới chưa biết đã xuất hiện trong phân tích.Đỉnh mới này không phù hợp với sản phẩm tiêu chuẩn BDDE.Sản phẩm tiêu chuẩn BDDE cũng đã trải qua quá trình phân tích chuyển đổi chất lượng tương tự (chuyển đổi MRM 203.30 / 129,10 Da) trong chế độ MRM tích cực.Nói chung, các phương pháp phân tích khác như sắc ký được sử dụng làm phép thử giới hạn để phát hiện BDDE trong hydrogel, nhưng giới hạn phát hiện tối đa (LOD) thấp hơn một chút so với 2 ppm.Mặt khác, cho đến nay, NMR và MS đã được sử dụng để mô tả mức độ liên kết ngang và / hoặc biến đổi của HA trong các đoạn đơn vị đường của các sản phẩm HA liên kết ngang.Mục đích của các kỹ thuật này chưa bao giờ là để định lượng phát hiện BDDE còn sót lại ở nồng độ thấp như chúng tôi mô tả trong bài viết này (LOD của phương pháp LC-MS của chúng tôi = 10 ppb).
Thời gian đăng: 09-01-2021